一 、准备工作
（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶 、杂质 、气泡不可使用 ，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡 ，再用专用离心机离心5分钟 。
（二）检测标本的准备：
1．红细胞悬液的制备 ：取被检者压积红细胞10微升，加入1.0－1.2毫升红细胞稀释液，外观应为均匀淡红色，无絮状物和血块 。
2．血清标本的制备 ：采集被检对象静脉血，放入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中 ，10分钟后离心，取上清 ；或者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置 12小时，或37℃放置2小时后离心，2000r/min,10分钟 ，取上清（该上清不得有絮状物或沉淀）。
二 、操作步骤
1. 将准备好的ABO.RhD血型定型试剂卡做好标记 。
2. 将待检者红细胞悬液分别加入**至第4管中 ，每管50ul 。
3. 将待检者血清分别加入第5和第6管中 ，每管50ul。
4. 将已知的A型和B型红细胞0.8%浓度悬液或0.8%浓度ABO血型反定型红细胞试剂 ，每管50ul分别加入第5和第6管。
5. 即刻使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟） ，取出肉眼判定结果 。
结果判定 ：
阳性结果 ：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。
阴性结果：被检红细胞抗原无相应的抗体结合 ，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的尖底部。
血型判定：
血型 |
抗A |
抗B |
抗D |
阴性对照 |
A细胞 |
B细胞 |
|
|
D 阳 性 |
A |
+ |
— |
+ |
— |
— |
+ |
B |
+ |
+ |
— |
+ |
— |
||
O |
— |
— |
+ |
— |
+ |
+ |
|
AB |
+ |
+ |
+ |
— |
— |
— |
|
|
D 阴 性 |
A |
+ |
— |
— |
— |
— |
+ |
B |
— |
+ |
— |
— |
+ |
— |
|
O |
— |
— |
— |
— |
+ |
+ |
|
AB |
+ |
+ |
— |
— |
— |
— |
|
三 、注意事项
1. 检测标本必须为抗凝血。
2. 红细胞标本一定不能被细菌污染 ，否则出现假阳性反应 。尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验 。
3. 血清标本：血清标本必须充分去纤维蛋白 ，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出 ，阻碍阴性红细胞沉淀 ，呈假阳性反应。
4. 如在微柱凝胶管中出现溶血现象 ，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应 ，也不排除其他原因所致溶血 ，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。
5. 若结果为±或1＋需进一步分析 ，可能为亚型或弱化抗原 。
6. 每日实验前 ，先取出微柱凝胶卡放置一段时间至室温，以防冷凝集 。
7. 试剂卡应放在18-25℃储存，如若长期放在4℃冰箱，建议每1-2个月取出 ，用专用离心机离心一次 ，以防止干胶或产生气泡 。
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