一 、 准备工作
（一）微柱凝胶试剂卡的准备 ：观察外观 ，如有干胶 、杂质 、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟 。
（二）检测标本的准备：
1．红细胞悬液的制备 ：将筛检红细胞或谱细胞配成0.8%浓度的悬液 。
2．血清标本的制备：采集被检对象静脉血 ，放入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中 ，10分钟后离心，取上清 ；或者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置 12小时，或37℃放置2小时后离心 ，2000r/min,10分钟 ，取上清（该上清不得有絮状物或沉淀）。
二、操作步骤
1. 将准备好的不规则抗体筛检卡做好标记；
2. 将配好的筛检细胞或谱细胞悬液加入标好的微管中 ，各一滴（或50μl） ；
3. 分别立即加入被检者血清1滴（或50μl） ；
4. 加样后的试剂卡 ，置37℃孵育器中孵育15分钟 ；
5. 使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500 rpm3分钟），取出肉眼观察结果。
结果判定 ：根据所提供的筛检红细胞或谱细胞的反应格局来判定结果
例：按Ⅰ(-) 、Ⅱ(4+) 、Ⅲ(-）的实验结果及提供如下的筛检红细胞反应格局来分析
筛检细胞反应格局
编号 |
Rh-hr |
Kidd |
MNS |
Duffy |
Diego |
Kell |
Lewis |
P |
|||||||||||
D |
C |
E |
c |
e |
Jka |
Jkb |
M |
N |
S |
s |
Fya |
Fyb |
Dia |
K |
k |
Lea |
Leb |
p1 |
|
I |
+ |
+ |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
+ |
+ |
- |
- |
- |
+ |
+ |
- |
+ |
II |
+ |
- |
+ |
+ |
- |
+ |
+ |
- |
+ |
- |
+ |
+ |
- |
- |
- |
+ |
- |
+ |
+ |
III |
+ |
+ |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
+ |
- |
+ |
- |
阴性结果用排除法,阳性结果用可能包含法 。
以前五种抗原为例 ：
Ⅰ(-) ： 可排除D 、C、e ；
Ⅱ(4+) ：判断可能含有D、E 、c ；
Ⅲ(-） ： 可排除D、C 、c、e ；
综上，可认为 ：此样品血清中可能含有-E
三 、 注意事项
1．应用直接抗人球蛋白微柱凝胶免疫试验检测病人红细胞时 ，一定要用适量EDTA的试管采血液标本 ，该标本不能放入4℃-10℃冰箱保存，以避免红细胞在病人体外致敏所致假阳性反应 。
2．红细胞标本一定不能被细菌污染 ，否则出现假阳性反应 。尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验 。如不得不用过夜血或陈旧血 ，则必须首先用该标本做阴性对照试验 ，以确定该标本是否可以做本实验 。
3．血清标本：血清标本必须充分去纤维蛋白 ，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出 ，阻碍阴性红细胞沉淀 ，呈假阳性反应 。
4．如在微柱凝胶管中出现溶血现象 ，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应 ，也不排除其他原因所致溶血 ，故对此标本一定认真分析 ，并向上级主管技术人员报告并讨论其原因 。
5．每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。
6．试剂卡应放在18-25℃储存，如若长期放在4℃冰箱，建议每1-2个月取出 ，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡 。
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